表皮角質形成(chéng)細胞的遷移是創面(m動漫GOiàn)愈合過(guò)程中皮膚再上皮化的基礎。利用單層原代人表皮角質形成(chéng)細胞進成全姑娘(jìn)行體外劃痕實驗是評估其遷移能(néng)力的一種(zhǒng)簡單有效的方法藝術在線。用機械劃痕法直接破壞融合成(chéng)單層的角質形成(chéng)細胞，破壞細胞之間及其MV成全與底層基質之間的黏附，這(zhè)類似于在體實驗中皮膚的物理創傷。角質形成(chéng)細胞飄雪在線將(jiāng)經(jīng)曆上皮到(dào)間充質的轉變，并增強其向(xiàng)彼此遷移的能(né高清版GOng)力，從而通過(guò)重組細胞-細胞和細胞-細胞外基質連接來彌補缺損。劃痕實驗可用于視頻免費功效原料和産品的修複、再生、修護和愈合等宣稱。然而，劃痕試驗看似簡單，但穩定建立可重複的劃痕方法是GO影院實驗室操作的基本功。

人類表皮角質形成(chéng)細胞(HEK)是一種(zhǒng)非常特殊的細胞類型，其起(qǐ)源于基底層，經(j成全免費īng)曆快速分化、移行、角化并最終脫落。隻有基底層或毛囊隆突部的幹細胞保持高增美麗好姑娘殖潛能(néng)。原代人HEK和永生化的人表皮細胞系HaCaT在RNA表達譜上存在顯著差異；差異主要在于調節細胞周姐姐姐姐期的基因不同。與HEK相比，HaCaT細胞的G1/S期與S期基因表達上調，負調控細胞進(jìn)入S期飄雪影院的基因則表達下調。與細胞周期調控相關的轉錄因子的表達也存在差異，如澱粉樣(yàng)β前體蛋白結合家族B成(成全丁香花chéng)員1(APBB1)、分離酶(ESPL1)、轉錄因子19(TCF19)和鋅指蛋MV大地白300(ZNF300)。研究發(fā)現，由于細胞在較高傳代次數下的分化和衰老，早期和晚期HEK細胞的轉錄組存直播MV在統計學(xué)意義的差異。例如，随著(zhe)培養代次的增加，細胞變大，增殖速度變慢(圖1B)，直到(d高清版丁香花ào)出現凋亡(圖1C)。因此，實驗室應該使用傳代早期的NEK(圖1A)，它們比高清姐姐晚期NEK更接近原始組織，而且與細胞系相比産生更具代表性和有意義的數據。

圖1 培養中的原代HEK：(A)健康、增殖的原代HEK。(B)分化的原代HEK(>3代)。(美麗丁香花C)凋亡的原代HEK。

    2、原代細胞分離

分離HEK是獲得充足良好(hǎo)的原代細胞的關鍵一步。為了獲得無成(chéng)纖維細胞的EK培養，表皮和真中文版影院皮的分離是必不可少的，應該由高效的裂解酶來完成(chéng)這(zhè)一步驟。這(zhè)種(zhǒ丁香花免費ng)酶能(néng)夠溫和地分解IV型膠原，而IV型膠原是基底膜緻密層的主要蛋白質，在裂解酶的姑娘噼裡啪啦作用下表皮與真皮分離。之後(hòu)再用第二種(zhǒng)酶--胰蛋白酶破壞表姐姐大地皮細胞與細胞之間的相互作用，導緻單個表皮細胞懸浮。使用角質形成(chéng)細胞專用培養液可進(jìn)一美麗動漫步誘導角質形成(chéng)細胞的增殖，其他表皮細胞類型，如黑素細胞、免疫細胞(如朗格漢斯細胞)以及神經(jīng)内免費國語分泌的默克爾細胞將(jiāng)丢失。

3、表皮修複原理

皮膚受損時(shí)需要修複表皮屏障。再上皮化是修複皮膚屏障的第一步，也是重建第一層國語成全角質形成(chéng)細胞和防止感染的過(guò)程。在基底層，這(zhè)一過(guò)程包括角質形成(chéng)好姑娘飄雪細胞從周圍表皮動員、有絲分裂和遷移，随後(hòu)是細胞分化和表皮屏障的完全修複。創傷發(GO藝術fā)生後(hòu)，細胞接觸抑制消失，導緻緊鄰傷口邊緣的角質形成(chéng)細胞遷移。上皮-間充質轉化(藝術飄雪EMT)的這(zhè)一過(guò)程使得與基底膜接觸的上皮細胞通過(guò)激活與增強的遷移能(飄雪噼裡啪啦néng)力、侵襲性、抗凋亡和産生細胞外基質(ECM)蛋白相關的生化變化而獲得間充質細胞表型。人體有三種(zhǒng)GO噼裡啪啦類型的EMT：第一種(zhǒng)發(fā)生在發(fā)育過(guò)程中，第二種(視頻在線zhǒng)發(fā)生在傷口愈合過(guò)程中作為作為修複過(guò)程的一部分，第三種(zhǒng)發(fā資源MV)生在癌症和轉移期間。

在第二種(zhǒng)EMT中，橋粒下調(E-鈣粘附素下調)使角質形成(chéng)細胞遷移，同時(sh免費姑娘í)表達新的纖維連接蛋白識别整合素(例如，α5β1和αvβ6)。特定細胞角蛋白的表達發(fā)生改變；特定角蛋白(K大地姐姐16和K17)與間充質細胞标記物vientin一起(qǐ)上調。促進(jìn)EMT轉變的特定轉錄因子SNA影院噼裡啪啦I1、Slug、ZEB1、ZEB2和twist在EMT誘導後(hòu)都(dōu)在EK中美麗噼裡啪啦上調。創傷愈合中的EMT與炎症有關；一旦炎症被(bèi)消除，傷口部位再次被(bèi)角質形成(chén噼裡啪啦好姑娘g)細胞覆蓋，通過(guò)激活GRHL2、OVOL1和Ovol2轉錄因子，就(jiù)會(huì)發(fā)生成全影院反向(xiàng)間充質-上皮轉化(MET)。

4、體外方法的優點

表皮遷移可以在體外使用原代HEK進(jìn)行研究。劃痕實驗是最有效的模拟體外再上皮化的技術。融合單層的原代飄雪好姑娘角質形成(chéng)細胞經(jīng)曆機械劃傷後(hòu)，殘留的細胞開(kāi)始遷移以恢複單層。原代HEK能姑娘國語(néng)夠很好(hǎo)地模拟在體傷口愈合過(guò)程中表皮細胞的遷移，特别是在動漫美麗細胞-基質和上皮細胞的細胞-細胞相互作用方面(miàn)。但是，強烈建議使用劃痕工具進(中文版高清版jìn)行方法的标準化。

【實驗流程】

劃痕實驗基本步驟包括在細胞單層中創建一個“傷口”，在細胞遷移開(kāi)始和遷移過噼裡啪啦成全(guò)程中定期捕獲圖像以閉合傷口，通過(guò)比較圖像或标記細胞以确定細胞遷美麗飄雪移速率、面(miàn)積和标志物變化，通過(guò)基因和蛋白的分析探讨遷移機制。其簡要流程如下（具體方成全影院案可咨詢華代公司）：

  1、人體皮膚組織處理及原代分離HEK

  2、原代HEK培養

  3、劃痕愈合試驗

  4、形态觀察、标志物檢測、基因和蛋白組分析

  5、數據分析和解釋

圖2、可在12孔闆底背面(miàn)劃線對(duì)于确保觀察和拍照時(shí)準确定位坐标成全噼裡啪啦非常必要，插入式劃痕器可使方法标準化

圖3、劃痕後(hòu)不同時(shí)段(0、12和20小時(shí))原代HEK遷移。

  1、可用商品化或自制刮刀進(jìn)行機械損傷操作，也可以使用塑料吸尖，但都(dōu)不夠标準好姑娘飄雪，建議使用劃痕專用培養皿。普通劃痕和标準化（插入式）劃痕的區别如下：

  2、人的HEK在體外很容易分化。為保持其增殖潛力，在培養時(shí)需細心觀察。建議每隔兩(liǎng)美麗動漫天更換一次培養基，以免細胞生長(cháng)超過(guò)80%。

  3、EDTA可破壞細胞與細胞的附著(zhe)，但不會(huì)破壞細胞與培養闆動漫在線的附著(zhe)。EDTA的使用將(jiāng)縮短胰酶作用的時(shí)間。

  4、細胞增殖和細胞遷移是細胞的兩(liǎng)種(zhǒng)不同行為。去除細成全GO胞培養上清液中的EGF和BPE可降低原代HEK細胞增殖能(néng)力。更普遍的作法是使用DNA交聯劑絲裂黴素C來動漫資源抑制增殖（注意使用濃度）。

  5、使用qRT-PCR進(jìn)行基因表達研究，可以量化EMT和遷移标志物高清版高清版的表達變化，如波形蛋白、角蛋白16或17(KRT16或KRT17)和ZeB，其在HEK遷移過(guò)程中上調。如果需GO噼裡啪啦要蛋白質分布分析，可以將(jiāng)細胞培養在小室載玻片或蓋玻片中，并用免疫細高清版資源胞化學(xué)(ICC)定位分子标記。

  6、使用測量軟件可以量化遷移過(guò)程。應注意細胞在塑料表面(miàn)上的遷移不是在一維方向(xi中文版成全àng)上移動，而是在二維方向(xiàng)上移動，因此建議計算遷移面(miàn)積以獲得更準确和更有意義丁香花噼裡啪啦的結果。

  7、不同供體皮膚的原代HNK細胞變異性可能(néng)很高。圖4顯示三個不同女性面(miàn國語高清版)部皮膚提取的原代HEK細胞，可以看到(dào)45%的變異性。當來自多個供體的HNK姐姐飄雪數據結合在一起(qǐ)時(shí)，應充分考慮年齡、性别和不同解剖區域的差異的幹擾作用。解決辦法資源直播是顯示每個供體的單獨數據或必須執行标準化；為了數據歸一，將(jiāng)所有處理組的遷移劃分為未處理組在每個供中文版直播體細胞内的遷移；然後(hòu)對(duì)不同的供體細胞進(jìn)行平均值和統計分析。

圖4、來自不同供體原代HEK的遷移差異

    看似簡單的劃痕試驗，背後(hòu)還(hái)有許多問題需要探讨直播GO：什麼(me)是自由式遷移？表皮-間質轉換究竟有什麼(me)機制？增殖、遷移和侵襲有什麼(m直播國語e)區别？遷移是怎麼(me)進(jìn)行的？且聽下回道(dào)來。

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